همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در باکتری e.coli

Authors

حسین رستمی

hossein rostami سید جعفر موسوی

seyed jafar moosavi فیروز ابراهیمی

firouz ebrahimi عباس حاجی زاده

abbas hajizadeh

abstract

سابقه و هدف: باکتری های کلستریدیوم بوتولینوم هفت نوع نوروتوکسین تولید می کنند که تیپ های a، b، e و f منجر به بوتولیسم در انسان می شوند. یکی از روش های درمانی بوتولیسم می تواند از طریق مهار فعالیت آنزیمی ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم توسط مهارکننده ها باشد. در این مطالعه، ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در وکتور بیانی pet28a همسانه سازی و در باکتری میزبان e. coli سویه bl21(de3) بیان شده است. مواد و روش ها: به منظور همانندسازی ناحیه مورد نظر، dna ژنومی باکتری استخراج گردید. با استفاده از واکنش pcr توالی مورد نظر تکثیر شد. سپس محصول pcr در وکتور pgem-t easy وارد و وکتور نوترکیب به سلول های میـزبان e. coli سویه dh5α منتقل گردید. سپس با واکنش الحاق محصول همسانه سازی شده از وکتور pgem-t easy به وکتور بیانی pet28a منتقـل شد. در نهایت پلاسمیـد نوترکیب pet28a به باکتـری e. coli سویه bl21(de3) انتقال داده شد. بیان ناحیه کاتالیتیک در شرایط استاندارد مورد مطالعه قرار گرفت. یافته ها: نتایج حاصل از برش آنزیمی و واکنش pcr بیانگر همانندسازی و زیر همانندسازی به ترتیب در وکتورهای pgem-t easy و pet28a بود. نتایج تعیین توالی نیز صحت حضور توالی مورد نظر را تأیید کرد. در نهایت بیان قطعه مورد مطالعه، با استفاده از ژل sds-page و آزمایش وسترن بلات تأیید گردید. استنتاج: همسانه سازی توالی مورد مطالعه، به ترتیب در وکتورهای pgem-t easy و pet28a با صحت کامل انجام گرفت. همچنین نتایج بیان و تأیید محصول بیانی در باکتری e. coli bl21(de3) بیانگر صحت بیان محصول مورد نظر بود.

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

همسانه سازی و بیان ناحیه کاتالیتیک نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در باکتری E.coli

Background and purpose: Clostridium botulinum bacteria produces seven types of botulinum neurotoxins among which types A, B, E and F are responsible for human botulism. One of the treatments for botulism is the inhibition of botulinum neurotoxins catalytic domain activity by inhibitors. In this study, botulinum neurotoxin type E catalytic domain has been cloned in pET28a vector and expressed in...

full text

همسانه سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع b باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری e. coli

پیش زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین های باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می شود. این نوروتوکسین ها دارای هفت سروتیپ از a – g می باشند. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجاد شده توسط bont/b استفاده از واکسن های نوترکیب ساخته شده ی ناحیه اتصالی آن می باشد. چون دارای اپی توپ های کافی برای تحریک سیستم ایمنی می باشد.مواد و روش ها: ابتدا سکانس ژن ناحیه اتصالی را از سایت ncbi گر...

full text

همسانه‌سازی و بیان ناحیه اتصالی نوروتوکسین نوع B باکتری کلستریدیوم بوتولینوم در باکتری E. coli

   Backgrounds & Aims: Botulism is caused by botulinum toxin. The best way to avoid the neurotoxin syndrome caused by BONT/B is to use recombinant vaccine made of BONT/B binding domain because binding domain has sufficient epitops to stimulate immune response. Materials & Methods: Initially BONT/B binding domain gene sequence were obtained from GenBank. Then the primers were designed. PCR react...

full text

بررسی ایمنی‌زایی نانوذرات کیتوسان حاوی پروتئین نوترکیب ناحیه اتصال‌دهنده نوروتوکسین بوتولینوم تیپ E در موش

Abstract Background and purpose: Clostridium botulinum neurotoxins are the most potent toxins that cause the life-threatening botulism syndrome in humans and animals. Researches have shown that the binding domain of the botulinum neurotoxin type E has a high immunogenicity effect that could be used as an efficient recombinant vaccine. The recombinant vaccines are not potent enough to stimulate...

full text

زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BD/A)

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین روش برای پیشگیری از سندرم حاصل از نوروتوکسین بوتولینوم (BoNT)، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) می‌باشد. در این مطالعه ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ A (BoNT/A) بررسی گردی...

full text

زیرهمسانه‌سازی و بررسی بیان ژن صناعی ناحیه اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B (BD/B

زمینه و هدف: سندرم بوتولیسم توسط نوروتوکسین باکتری کلستریدیوم بوتولینوم ایجاد می‌شود. این نوروتوکسین دارای 7 سروتیپ از A-G می‌باشد. بهترین راه برای جلوگیری از سندرم بوتولیسم ایجادشده توسط BoNT/B، استفاده از واکسن‌های نوترکیب ساخته‌شده از ناحیه اتصالی آن (به‌علت داشتن اپی‌توپ‌های کافی برای تحریک سیستم ایمنی) است. در این پژوهش بیان زیرواحد اتصالی نوروتوکسین بوتولینوم تیپ B، به‌منظور کاندید واکسن ...

full text

My Resources

Save resource for easier access later


Journal title:
مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندران

جلد ۲۲، شماره ۹۷، صفحات ۱۴۸-۱۵۷

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023